浸提液法（提取法）是最常用的細胞毒性測試方法，適用于大多數醫(yī)療級 TPE 材料，尤其適合評估材料釋放的可溶性毒性物質。該方法的核心是通過浸提過程模擬材料在體內的降解釋放行為，具體步驟如下：首先按標準要求制備 TPE 試樣，切割成規(guī)定尺寸（通常表面積與浸提液體積比為 6cm²/mL），去除表面污染物后，選用合適的浸提液（如含血清的 MEM 培養(yǎng)基、生理鹽水或 DMSO 溶液），在 37℃±1℃條件下浸提 24 小時 ±2 小時，獲得材料浸提液。隨后將浸提液與 L929 小鼠成纖維細胞（或其他指定細胞株）共培養(yǎng)，培養(yǎng)時間通常為 24 小時、48 小時或 72 小時，通過顯微鏡觀察細胞形態(tài)變化（如是否出現溶解、皺縮、脫落），并采用 MTT 法、CCK-8 法等定量檢測細胞相對增殖率（RGR）。判斷標準為：RGR＞100% 為無毒性，70%~100% 為輕微毒性，50%~69% 為中度毒性，＜50% 為重度毒性，醫(yī)療級 TPE 材料需達到 RGR＞70% 才算通過測試。

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  直接接觸法適用于評估具有一定形狀和硬度的 TPE 制品（如密封墊圈、小型部件），可直接觀察材料與細胞的接觸反應。測試時，將滅菌后的 TPE 試樣直接放置在長滿 L929 細胞的培養(yǎng)皿中，試樣與細胞層接觸面積不超過培養(yǎng)面積的 50%，避免影響細胞營養(yǎng)交換。共培養(yǎng) 24 小時～72 小時后，觀察試樣周圍細胞的生長狀態(tài)，重點關注接觸區(qū)域是否出現細胞死亡、抑制帶或形態(tài)異常。該方法的優(yōu)勢是模擬材料與組織直接接觸的場景，但需確保試樣無菌且不釋放影響培養(yǎng)環(huán)境的物質（如 pH 值變化、滲透壓異常），若 TPE 材料吸水性強或易溶脹，可能干擾測試結果，需謹慎選用。?

 

  間接接觸法（瓊脂擴散法 / 濾膜擴散法）適用于評估可能釋放揮發(fā)性或低分子量毒性物質的 TPE 材料，通過物理屏障避免材料與細胞直接接觸，僅讓毒性物質擴散至細胞層。瓊脂擴散法中，在細胞層上方鋪設一層瓊脂糖凝膠，將 TPE 試樣放置在凝膠表面，培養(yǎng)后觀察凝膠下方細胞是否出現毒性反應區(qū)域（如細胞溶解帶）；濾膜擴散法則通過微孔濾膜分隔試樣與細胞，允許小分子毒性物質透過濾膜作用于細胞。兩種方法均通過觀察細胞毒性反應的范圍和程度判斷毒性等級，若出現明顯的細胞死亡區(qū)域，說明材料存在可擴散的毒性物質，需進一步優(yōu)化配方。?

 

  此外，還有一些補充測試方法用于特殊場景。如流式細胞術可定量分析細胞凋亡率，評估材料對細胞存活的潛在影響；乳酸脫氫酶（LDH）釋放試驗通過檢測細胞培養(yǎng)液中 LDH 的含量，反映細胞 membrane 損傷程度，輔助判斷細胞毒性類型（如壞死性毒性）。對于可降解醫(yī)療級 TPE 材料，還需進行動態(tài)浸提測試，模擬材料降解過程中的毒性物質釋放曲線，評估不同降解階段的細胞毒性變化。?

 

  無論采用哪種方法，測試過程均需嚴格控制變量：試樣制備需標準化（如尺寸、表面處理），浸提條件需根據材料特性選擇（如高溫加速浸提適用于耐高溫 TPE），細胞培養(yǎng)環(huán)境需穩(wěn)定（溫度、CO?濃度、濕度），并設置陰性對照（如高密度聚乙烯浸提液）和陽性對照（如 0.1% 苯酚溶液）驗證測試體系有效性。只有通過多種方法的綜合評估，才能全面準確地判斷醫(yī)療級 TPE 材料的細胞毒性風險，確保其在醫(yī)療場景中的使用安全性。