浸提液法（提取法）是最常用的細(xì)胞毒性測(cè)試方法，適用于大多數(shù)醫(yī)療級(jí) TPE 材料，尤其適合評(píng)估材料釋放的可溶性毒性物質(zhì)。該方法的核心是通過(guò)浸提過(guò)程模擬材料在體內(nèi)的降解釋放行為，具體步驟如下：首先按標(biāo)準(zhǔn)要求制備 TPE 試樣，切割成規(guī)定尺寸（通常表面積與浸提液體積比為 6cm²/mL），去除表面污染物后，選用合適的浸提液（如含血清的 MEM 培養(yǎng)基、生理鹽水或 DMSO 溶液），在 37℃±1℃條件下浸提 24 小時(shí) ±2 小時(shí)，獲得材料浸提液。隨后將浸提液與 L929 小鼠成纖維細(xì)胞（或其他指定細(xì)胞株）共培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間通常為 24 小時(shí)、48 小時(shí)或 72 小時(shí)，通過(guò)顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化（如是否出現(xiàn)溶解、皺縮、脫落），并采用 MTT 法、CCK-8 法等定量檢測(cè)細(xì)胞相對(duì)增殖率（RGR）。判斷標(biāo)準(zhǔn)為：RGR＞100% 為無(wú)毒性，70%~100% 為輕微毒性，50%~69% 為中度毒性，＜50% 為重度毒性，醫(yī)療級(jí) TPE 材料需達(dá)到 RGR＞70% 才算通過(guò)測(cè)試。

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  直接接觸法適用于評(píng)估具有一定形狀和硬度的 TPE 制品（如密封墊圈、小型部件），可直接觀察材料與細(xì)胞的接觸反應(yīng)。測(cè)試時(shí)，將滅菌后的 TPE 試樣直接放置在長(zhǎng)滿 L929 細(xì)胞的培養(yǎng)皿中，試樣與細(xì)胞層接觸面積不超過(guò)培養(yǎng)面積的 50%，避免影響細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)交換。共培養(yǎng) 24 小時(shí)～72 小時(shí)后，觀察試樣周圍細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)，重點(diǎn)關(guān)注接觸區(qū)域是否出現(xiàn)細(xì)胞死亡、抑制帶或形態(tài)異常。該方法的優(yōu)勢(shì)是模擬材料與組織直接接觸的場(chǎng)景，但需確保試樣無(wú)菌且不釋放影響培養(yǎng)環(huán)境的物質(zhì)（如 pH 值變化、滲透壓異常），若 TPE 材料吸水性強(qiáng)或易溶脹，可能干擾測(cè)試結(jié)果，需謹(jǐn)慎選用。?

 

  間接接觸法（瓊脂擴(kuò)散法 / 濾膜擴(kuò)散法）適用于評(píng)估可能釋放揮發(fā)性或低分子量毒性物質(zhì)的 TPE 材料，通過(guò)物理屏障避免材料與細(xì)胞直接接觸，僅讓毒性物質(zhì)擴(kuò)散至細(xì)胞層。瓊脂擴(kuò)散法中，在細(xì)胞層上方鋪設(shè)一層瓊脂糖凝膠，將 TPE 試樣放置在凝膠表面，培養(yǎng)后觀察凝膠下方細(xì)胞是否出現(xiàn)毒性反應(yīng)區(qū)域（如細(xì)胞溶解帶）；濾膜擴(kuò)散法則通過(guò)微孔濾膜分隔試樣與細(xì)胞，允許小分子毒性物質(zhì)透過(guò)濾膜作用于細(xì)胞。兩種方法均通過(guò)觀察細(xì)胞毒性反應(yīng)的范圍和程度判斷毒性等級(jí)，若出現(xiàn)明顯的細(xì)胞死亡區(qū)域，說(shuō)明材料存在可擴(kuò)散的毒性物質(zhì)，需進(jìn)一步優(yōu)化配方。?

 

  此外，還有一些補(bǔ)充測(cè)試方法用于特殊場(chǎng)景。如流式細(xì)胞術(shù)可定量分析細(xì)胞凋亡率，評(píng)估材料對(duì)細(xì)胞存活的潛在影響；乳酸脫氫酶（LDH）釋放試驗(yàn)通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液中 LDH 的含量，反映細(xì)胞 membrane 損傷程度，輔助判斷細(xì)胞毒性類型（如壞死性毒性）。對(duì)于可降解醫(yī)療級(jí) TPE 材料，還需進(jìn)行動(dòng)態(tài)浸提測(cè)試，模擬材料降解過(guò)程中的毒性物質(zhì)釋放曲線，評(píng)估不同降解階段的細(xì)胞毒性變化。?

 

  無(wú)論采用哪種方法，測(cè)試過(guò)程均需嚴(yán)格控制變量：試樣制備需標(biāo)準(zhǔn)化（如尺寸、表面處理），浸提條件需根據(jù)材料特性選擇（如高溫加速浸提適用于耐高溫 TPE），細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境需穩(wěn)定（溫度、CO?濃度、濕度），并設(shè)置陰性對(duì)照（如高密度聚乙烯浸提液）和陽(yáng)性對(duì)照（如 0.1% 苯酚溶液）驗(yàn)證測(cè)試體系有效性。只有通過(guò)多種方法的綜合評(píng)估，才能全面準(zhǔn)確地判斷醫(yī)療級(jí) TPE 材料的細(xì)胞毒性風(fēng)險(xiǎn)，確保其在醫(yī)療場(chǎng)景中的使用安全性。